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熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測量單細胞中比率鈣中國醫(yī)學物理學雜志1999年第3期第16卷實驗研究作者：馬曉冬朱曉亮趙清張瑾張颯雷國華黃行許鮑永耀單位：馬曉冬趙清張瑾張颯雷國華黃行許鮑永耀（*軍醫(yī)大學中心實驗室）；朱曉亮（南方醫(yī)院皮膚科,廣東廣州510515）關(guān)鍵詞：激光掃描共聚焦顯微鏡；Fluo-3/AM；FuraRed；比率鈣...摘要：應(yīng)用ACAS570激光掃描共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM簡稱共焦顯微...

激光掃描共焦顯微鏡（LSCM）是八十年代問世的一種新型分析儀器，由于其高分辨率，高靈敏度，高放大率等特點，在細胞水平上能作多種功能測量和分析，成為分析細胞學的重要研究工具，激光掃描共焦顯微鏡是在顯微鏡基礎(chǔ)上配置激光光源，掃描裝置，共軛聚焦裝置和檢測系統(tǒng)而形成的新型顯微鏡。它對活細胞分層掃描后得到光學切片，可進行細胞三維重建。測量分析細胞形態(tài)學參數(shù)和熒光強度。利用熒光探針標記LSCM可以對細胞內(nèi)微細結(jié)構(gòu)和離子的動態(tài)變化進行定性、定量、定時和定位分析。LSCM可以進行顯微手術(shù)，細...

摘要：目的建立流式細胞儀測定血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作為鈣指示劑，在有或無細胞外鈣\[Ca2+\]o存在的條件下，測定靜息和凝血酶激活狀態(tài)下人血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的變化。結(jié)果Fluo3AM標記的血小板的平均熒光強度明顯增加。凝血酶使負載Fluo3AM標記的血小板胞漿\[Ca2+\]i明顯增加，且顯示劑量依賴和對\[Ca2+\]o的依賴。結(jié)論凝血酶引起血小板胞漿\[Ca2+\]i增加的來源主要是\[Ca2...

培養(yǎng)某一類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，MEM做粘附細胞培養(yǎng)"細胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細胞培養(yǎng)"細胞培養(yǎng)是一個好的開始，各種目的無血清培養(yǎng)AIMV（12005）培養(yǎng)基（SFM）。L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)中重要嗎？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，但是確切的降解率一...

（一）直接免疫熒光標記法取一定量細胞（約1X106細胞／ml），在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上（）,再直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應(yīng)（如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入），。孵育20-60分鐘后，用PBS（pH7．2—7．4）洗1-2次，加入緩沖液重懸，上機檢測。本方法操作簡便，結(jié)果準確，易于分析，適用于同一細胞群多參數(shù)同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高，但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾，因...

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是...

的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應(yīng)用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結(jié)果。4.1標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標...

一、原理（一）什么是熒光，簡單地講，當用一定波長的光（如紫外光）照射某種物質(zhì)時，經(jīng)過照射的物質(zhì)在極短時間內(nèi)即可發(fā)射出一種可見的光，這種光即為熒光。在生物中，由于產(chǎn)生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：1．自發(fā)熒光：在生物的某些組織中，經(jīng)紫外線照射后能直接發(fā)射出熒光的稱為自發(fā)熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經(jīng)紫外線照射后，即可發(fā)出紅色熒光。2．次生熒光：有些生物組織經(jīng)紫外線照射后，并不能發(fā)出熒光，但是當它吸收熒光染料后也可以產(chǎn)生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光...

1．固定：用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。BouinS固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強，固定較好，結(jié)構(gòu)完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標本的長期保存。PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結(jié)構(gòu)及許多抗原的抗原性保存...

臨床檢驗常見的標本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。（一）臨床標本的收集A、血液標本有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應(yīng)盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應(yīng)在標本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無名指內(nèi)側(cè)采血，該部位應(yīng)無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他...

ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領(lǐng)域。（一）原理ELISA是以免疫學反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除...

動物樣品的采集及處理方法遺傳學數(shù)據(jù)在野生動物和圈養(yǎng)動物的保護和管理中變得日益重要。在本文中，我們總結(jié)了一些能簡便而有效地獲得樣品及數(shù)據(jù)的方法。我們在采集樣品之前，對將要進行的遺傳學分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，當采集地與實驗室有相當距離時，采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地，這就要求采集者應(yīng)具備一定的經(jīng)驗。首先，所有樣品均應(yīng)以個體序號進行標注，并且應(yīng)寫上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期，越詳盡越好，以便同一個體的不同類數(shù)據(jù)可以相互引用，另外，地理來...