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        抗體檢測(cè)通用ELISA操作流程(效價(jià)測(cè)定)

        更新時(shí)間:2025-07-25點(diǎn)擊次數(shù):196

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        抗體檢測(cè)通用ELISA操作流程(效價(jià)測(cè)定)

        1.包被步驟:

        1)用包被緩沖液配制1-10 μg/ml抗原溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)

        2)向高結(jié)合力ELISA板(貨號(hào)80112)每孔加入100μl抗原溶液,覆以封板膜,室溫輕搖孵育2-6小時(shí)或4℃過夜

        3)吸棄溶液,用洗滌緩沖液洗板2

        2.封閉步驟:

        1)用封閉緩沖液母液配制工作液,每孔加入300 μl,室溫輕搖孵育2-6小時(shí)或4℃過夜

        2)吸棄封閉液并在吸水紙上拍干,板子可立即使用或密封保存于4℃?zhèn)溆?/span>

        抗體效價(jià)檢測(cè):

        1)用抗體稀釋液對(duì)免疫前/免疫后血清進(jìn)行梯度稀釋(1:1001:100,000),每孔加入100ul。覆以封板膜,室溫輕搖孵育30分鐘。

        2)吸棄液體,用洗滌緩沖液洗板5次(每次200-300 μl,洗滌不充分會(huì)導(dǎo)致高背景)

        3)用抗體稀釋液配制HRP標(biāo)記抗兔二抗(1:5,000-1:20,000),每孔加入100μl(稀釋不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致顯色過弱或背景過高)

        4)覆以封板膜,室溫輕搖孵育30分鐘

        5)吸棄液體,洗板5次后拍干

        6)每孔加入100 μl現(xiàn)成TMB底物溶液

        7)覆以封板膜,室溫輕搖孵育至陽(yáng)性孔出現(xiàn)藍(lán)色(最長(zhǎng)15分鐘)

        8)每孔加入100 μl終止液,藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色

        9450 nm波長(zhǎng)下讀取吸光度

        注:所有試劑需使用新槍頭及加液槽添加。除特異性抗原/抗體外,ELISA所需全部試劑均可通過試劑盒獲取。

        注意事項(xiàng):

        1)本ELISA流程適用于針對(duì)純化抗原(蛋白質(zhì)或多肽)產(chǎn)生的抗體的定性檢測(cè),不適用于血清或其他體液中抗體濃度的定量測(cè)定。

        2)本流程默認(rèn)一抗來(lái)自兔源,若使用其他宿主動(dòng)物需選用相應(yīng)二抗。

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        品牌

        貨號(hào)

        產(chǎn)品名稱

        英文名稱

        4ADI

        80150

        小鼠血清抗體檢測(cè)試劑盒

        Mouse Primary   Antibody (A+G+M) detection and titration and titration ELISA kit, Qualitative   (sufficient for 500-1000 tests)

        4ADI

        80155

        大鼠血清抗體檢測(cè)試劑盒

        Rat Primary   Antibody (A+G+M) detection and titration and titration ELISA kit, Qualitative   (sufficient for 500-1000 tests)

        4ADI

        80160

        兔血清抗體檢測(cè)試劑盒

        Rabbit Primary   Antibody (A+G+M) detection and titration and titration ELISA kit, Qualitative   (sufficient for 500-1000 tests)

        4ADI

        80165

        山羊血清抗體檢測(cè)試劑盒

        Goat Primary   Antibody (A+G+M) detection and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient   for 500-1000 tests)

        4ADI

        80166

        綿羊血清抗體檢測(cè)試劑盒

        Sheep Primary   Antibody (A+G+M) detection and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient   for 500-1000 tests)

        4ADI

        80170

        人血清抗體檢測(cè)試劑盒

        Human Primary   Antibody (A+G+M) detection and titration ELISA kit, Qualitative (sufficient   for 500-1000 tests)

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